Publication: Purificación y caracterización preliminar de un virus asociado a café Coffea arabica L.
Loading...
Date
2004-09
Authors
Ángel Calle, Carlos Ariel
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Desde finales de 1997 cuando se mencionó la posible existencia de un nuevo virus en café (del tipo Badnavirus), se iniciaron los estudios en CENICAFÉ con la colaboración de otras instituciones, tendientes a validar esta hipótesis. Se confirmó que en efecto era un virus, transmisible por injerto, pero no era un Badnavirus. En esa oportunidad sólo se visualizaron partículas isométricas de aproximadamente 60nm de diámetro, con ayuda del microscopio electrónico de transmisión. Posteriormente en CENICAFÉ, se realizaron nuevas investigaciones con el fin de estudiar los métodos de transmisión de este nuevo virus, algunas propiedades físicas, la descripción de los síntomas que ocasiona y el efecto sobre el desarrollo de la planta en etapas tempranas del cultivo. Se encontró que este virus podía transmitirse de manera eficiente por medios mecánicos, por injerto y por insectos (áfidos), tanto de café a café, como de y hacia plantas indicadoras u hospedantes como Chenopodium amaranticolor y Ch. quinoa, más no fue posible transmitirlo por semilla. Se obtuvieron diversos síntomas y se determinó su efecto en la reducción del área foliar y altura de las plantas menores a 1 año, entre otros resultados importantes.
Los anteriores resultados dieron pié a plantear la hipótesis, donde este virus del café pertenecería al género Caulimovirus o uno muy cercano dentro de la familia Caulimoviridae. Este hecho sería algo nuevo para la caficultura nacional y posiblemente mundial, ya que en café, solamente está registrado y aceptado oficialmente el virus de la mancha anular (Coffee ringspot, Nucleorhabdovirus -CoRSV). En la actualidad, CENICAFÉ está en el proceso de recuperación del virus y verificación de su presencia infectiva en la zona cafetera registrada.
Con el propósito de caracterizar preliminarmente este virus del café tanto biológica, fisicoquímica y molecularmente, se requieren adelantar diversas investigaciones que permitan incrementar el virus experimentalmente, purificarlo, obtener e identificar el ácido nucleico que lo conforma, y secuenciar su genoma. De esta forma, con la información generada y nuevas investigaciones que se planteen en un corto o mediano plazo, se podrá conocer la posible clasificación taxonómica del nuevo virus del café.
El presente proyecto contempla varias etapas como son: obtención de inóculo del virus en el área afectada y de fuentes experimentales para iniciar un proceso de incremento en café y en plantas hospedantes. Para esto, se realizará una determinación de posibles hospedantes utilizando plantas de especies arvenses presentes en la zona cafetera y de otras especies conocidas por su susceptibilidad a virus. Luego, con el virus incrementado en plantas, se realizarán experimentos para buscar la purificación del virus, paso esencial para las distintas investigaciones futuras con el patógeno. Además, se realizará la verificación de la patogenicidad del virus y pruebas de infectividad determinando algunas propiedades físicas.
Después de purificado parcial o totalmente el virus, se realizarán experimentos con el fin de extraer su ácido nucleico, el cual se fragmentará con enzimas de restricción de amplio uso, fragmentos que serán secuenciados para determinar posibles homologías. Después de confirmado lo anterior, se podrá avanzar en la elaboración del mapa físico usando diversas enzimas de restricción, y los fragmentos obtenidos podrán clonarse dentro de plásmidos o vectores, para contar con una librería del virus, y avanzar en la secuenciación parcial del genoma.