Publication: Inmunogenicidad y capacidad bloqueadora de la transmisión del antígeno de P. vivax Pvs48/45 en un esquema de inmunización/refuerzo/reto en monos Aotus.
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Date
2017-01
Authors
Herrera Valencia, Socrates
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Abstract
La malaria es un problema de salud pública mundial que anualmente causa entre 300 a 500 millones de casos y casi 1 millón de (WHO 2008) por lo que una vacuna efectiva contra la misma sería una herramienta valiosa para prevenir la infección, reducir la carga de la enfermedad y/o disminuir su transmisión. Entre estas, las vacunas denominadas bloqueadoras de la trasmisión (BT) son consideradas una de las herramientas más prometedoras para alcanzar este objetivo. Estas vacunas se basan en el principio de que la transmisión del parásito de la malaria de los seres humanos al mosquito vector puede ser inhibida por anticuerpos que bloqueen la fertilización del parásito o la invasión del parásito al intestino medio del mosquito. Las proteínas expresadas en la superficie de los gametocitos del Plasmodium inducen durante la infección malárica, la producción de dichos anticuerpos y por tanto son considerados candidatos potenciales para el desarrollo de vacunas BT (Baird, Masbar et al. 1998; Aponte, Menendez et al. 2007). En regiones endémicas los sueros de algunos individuos previamente expuestos a P. vivax tienen la capacidades variables de inducir BT in vitro (Arevalo-Herrera, Solarte et al. 2005; Arevalo-Herrera, Solarte et al. 2011).
Entre los candidatos a vacuna BT se encuentra la proteína Pfs48/45, que se expresada en la superficie de los gametocitos de P. falciparum. A pesar de la dificultad de expresar esta proteína en el laboratorio(Chowdhury, Angov et al. 2009), La evaluación inmunogénica en ratones y primates de una versión recientemente producida en no-humanos ha mostrado una potente actividad BT in vitro (~93%). Basados en estos prometedores resultados y ante la importancia epidemiológica del P. vivax, el Centro Internacional de Vacunas (CIV) ha trabajado en la transferencia de la tecnología y ha adelantado estudios preliminares de caracterización de la proteína Pvs48/45 (homologa de Pfs48/45). La proteína fue recientemente expresada en Escherichia coli y su antigenicidad confirmada usando sueros de áreas endémicas de Colombia. Adicionalmente, se demostró su inmunogenicidad en el sistema murino y se confirmó la actividad BT in vitro.
Con base en estos resultados preliminares nos proponemos como objetivo general determinar la inmunogenicidad y capacidad BT del antígeno de P. vivax Pvs48/45 en primates del género Aotus. Este objetivo será ejecutado por medio de los siguientes objetivos específicos que permitirán responder importantes preguntas de inmunología y vacunología: 1) Evaluar la inmunogenicidad de la proteína recombinante Pvs48/45 en monos Aotus lemurinus griseimembra; 2) Evaluar la capacidad de la proteína Pvs48/45 para reforzar la respuesta de anticuerpos inducida por exposición previa a gametocitos del parásito; 3) Evaluar el nivel de refuerzo en la respuesta inmunológica inducida por la proteína Pvs48/45 mediante la posterior exposición de los primates al P. vivax; 4) Determinar ex vivo la actividad BT de anticuerpos purificados específicos para la proteína Pvs48/45.
Metodológicamente, se propone escalar la producción de la proteína en E. coli, purificarla y usarla para determinar la inmunogenicidad y la eficacia para BT en monos Aotus. Se establecerán 3 grupos de monos Aotus lemurinus griseimembra: un grupo de 6 monos Aotus naive (Grupo A) será inmunizado con la Pvs48/45 (50 ?g/dosis) utilizando como adyuvante GLA-SE (500 ?l/dosis), un grupo de 6 Aotus (Grupo B) previamente expuesto y curado de la infección por P. vivax que será inmunizado con la misma formulación para investigar su capacidad de refuerzo de la proteína sobre los anticuerpos inducidos por el parásito, y un grupo de 6 animales (Grupo C) que será inmunizado con solución salina formulada en el mismo adyuvante como control. Las inmunizaciones se realizarán los días 0, 60 y 120 y el reto infeccioso se realizará en el día 150. Los animales serán sangrados en los días 0, 30, 90, 150 y 180, y los sueros serán utilizados para determinar la actividad.