Generación y validación de un modelo celular diseñado para el tamizaje genético mediante RNA de interferencia en el complejo macrófago infectado por L. braziliensis.

Ovalle Bracho, Clemencia Elena

Publication:
Generación y validación de un modelo celular diseñado para el tamizaje genético mediante RNA de interferencia en el complejo macrófago infectado por L. braziliensis.

dc.contributor.author	Ovalle Bracho, Clemencia Elena
dc.contributor.corporatename	Centro Dermatológico Federico Lleras Acosta (Bogotá, Colombia)	spa
dc.contributor.researchgroup	COL0048269 - Dermatología Tropical
dc.contributor.researchgroup	COL0049533 - Modelamiento y control de sistemas biológicos
dc.coverage.spatial	Colombia
dc.date.accessioned	2020-02-13T17:03:07Z
dc.date.accessioned	2020-12-18T01:22:53Z
dc.date.available	2020-02-13T17:03:07Z
dc.date.available	2020-12-18T01:22:53Z
dc.date.issued	2014
dc.description.abstract	Las enfermedades conocidas como leishmaniasis afectan millones de personas en el mundo. En Colombia se reportaron más de 12000 casos en el 2009 y hasta la semana epidemiológica 19 del 2010, se han reportado más de 4400 casos . De estos casos alrededor del 99% corresponden a leishmaniasis cutánea y la fracción restante a leishmaniasis mucocutánea y visceral. Por esta razón se considera a la leishmaniasis como un problema de salud púbica en el país. Pese a esto, existe un repertorio escaso de medicamentos y tratamientos terapéuticos para la enfermedad y hay evidencia de resistencia del parásito al tratamiento más utilizado (Antimonios pentavalentes). En un contexto general de enfermedad, las estrategias utilizadas actualmente para la búsqueda de dianas terapéuticas involucran aproximaciones genómicas, proteómicas, bioinformáticas y de tamizaje fenotípico causado por compuestos químicos y moléculas pequeñas. Muchas de estas aproximaciones requieren de modelos experimentales adaptados a plataformas de tamizaje fenotípico de alto rendimiento, en los que se evalúa un gran número de compuestos de manera simultánea y eficiente para la identificación de posibles dianas terapéuticas para patologías particulares. En el caso de leishmaniasis se han utilizado algunas de estas aproximaciones, pero aún no se ha explorado de manera sistemática el efecto de la modulación genética a nivel de la célula hospedera como un mecanismo de entendimiento de su interacción con el parásito. Una comprensión extensa de la maquinaria celular hospedera necesaria para el proceso de infección por parte del parásito, brindará nuevas luces con respecto a las alternativas para el control del parásito. En este proyecto se plantea la generación y validación de un modelo celular explícitamente diseñado para facilitar la identificación sistemática de los genes del macrófago necesarios para el proceso de infección por parte de Leishmania braziliensis, en plataformas de alto rendimiento. Este modelo permitirá utilizar silenciamiento genético mediado por RNA de interferencia. El funcionamiento de los eventos de silenciamiento, podrá verificarse gracias a un gen reportero (EmGFP) expresado de manera constitutiva en el macrófago. En el marco del proyecto, el modelo será validado mediante la confirmación experimental de su habilidad para: 1. Permitir infección in vitro por parte de Leishmania braziliensis en proporciones similares a las registradas en macrófagos normales. 2. Permitir la verificación fenotípica del silenciamiento del gen reportero (EmGFP) de manera simultánea con el silenciamiento de un gen de interés (gen modelo). 3. Permitir la verificación fenotípica del efecto del silenciamiento genético, en el contexto del macrófago infectado in vitro, con Leishmania braziliensis. Esta verificación fenotípica debe ser compatible con experimentos realizados en plataformas de alto rendimiento y por lo tanto debe requerir un mínimo de manipulación experimental. El objetivo general del proyecto es: Generar un modelo celular de macrófagos para la identificación de fenotipos inducidos por silenciamiento genético con RNA de interferencia, en el contexto del macrófago infectado por L. braziliensis y validar este modelo mediante la evaluación del efecto del silenciamiento de un gen con expresión diferencial en macrófagos infectados por este parásito. Este objetivo se cumplirá mediante el desarrollo de los siguientes objetivos específicos: 1. Generar una línea celular de macrófagos con expresión constitutiva de al menos una proteína fluorescente a manera de gen reportero. Metodología: Se implementará un método de transducción lentiviral para la modificación genética de la línea celular humana U937, con el fin de generar los precursores de macrófagos con expresión constitutiva de EmGFP. Como alternativa de marcación fluorescente constitutiva, se generará una línea celular derivada de U937, con expresión de la proteína marcadora de membrana: DsRed-Monomer-Mem (DRMM). Las línea.	spa
dc.format.extent	20 páginas.	spa
dc.identifier.instname	Colciencias	spa
dc.identifier.reponame	Repositorio Colciencias	spa
dc.identifier.repourl	http://colciencias.metabiblioteca.com.co	spa
dc.identifier.uri	https://colciencias.metadirectorio.org/handle/11146/40043
dc.language.iso	spa	spa
dc.relation.ispartofseries	Informe;
dc.rights.accessrights	info:eu-repo/semantics/openAccess	spa
dc.rights.accessrights	http://purl.org/coar/access_right/c_abf2	spa
dc.rights.creativecommons	https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/	spa
dc.subject.proposal	Leishmania braziliensis	spa
dc.subject.proposal	Modelo celular	spa
dc.subject.proposal	Plataforma de alto rendimiento	spa
dc.subject.proposal	Silenciamiento genético	spa
dc.subject.proposal	Tamizaje genético	spa
dc.title	Generación y validación de un modelo celular diseñado para el tamizaje genético mediante RNA de interferencia en el complejo macrófago infectado por L. braziliensis.	spa
dc.type	Informe de investigación	spa
dc.type.coar	http://purl.org/coar/resource_type/c_18ws	spa
dc.type.content	Text	spa
dc.type.driver	info:eu-repo/semantics/report	spa
dc.type.redcol	https://purl.org/redcol/resource_type/PID	spa
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dc.type.version	http://purl.org/coar/version/c_71e4c1898caa6e32	spa
dc.type.version	info:eu-repo/semantics/submittedVersion	spa
dspace.entity.type	Publication
oaire.awardnumber	212051928534	spa
oaire.funderidentifier.colciencias	314-2010
oaire.fundername	Departamento Administrativo de Ciencia, Tecnología e Innovación [CO] Colciencias	spa
oaire.fundingstream	Programa Nacional de CTeI en Salud	spa
oaire.objetives	Generar un modelo celular de macrófagos para la identificación de fenotipos inducidos por silenciamiento genético con RNA de interferencia, en el contexto del macrófago infectado por L. braziliensis y validar este modelo mediante la evaluación del efecto del silenciamiento de un gen con expresión diferencial en macrófagos infectados por este parásito.	spa