Abadia Serna, Beatriz2024-01-092024-01-092008-05-06https://repositorio.minciencias.gov.co/handle/20.500.14143/502011 documentoIncrementar los índices reproductivos del hato bovino, ha sido por años la preocupación del productor y el motivo de los trabajos de investigación en el ámbito internacional y nacional. La fertilidad del toro incide directamente en los índices reproductivos del hato. La investigación al respecto ha evidenciado por ejemplo, que los valores de los parámetros de calidad seminal (volumen del eyaculado, concentración, viabilidad, motilidad y morfología espermática), con los que comúnmente se infiere sobre la fertilidad del reproductor, no siempre se relacionan con la fertilidad in vivo del animal. Nuestro grupo de trabajo estandarizó e implementó en años recientes, las técnicas in vitro de penetración espermática de oocitos bovinos y de inducción de la reacción acrosómica del espermatozoide con el fin de evaluar la habilidad fecundante de espermatozoides de toros de las razas criollas colombianas (Sanmartinero, Romosinuano, ·Blanco Orejinegro y Costeño con Cuernos) y las razas foráneas Cebú y Holstein. Estas investigaciones evidenciaron que los porcentajes de oocitos penetrados (in Vitro), por espermatozoides de toros criollos, y el incremento en el porcentaje de espermatozoides con acrosoma reaccionado, eran superiores a los presentados por espermatozoides de las razas foráneas.RESUMEN INTRODUCCIÓN OBJETIVOS General Específicos MATERIALES YMETODOS CONTENIDO 4.1 Unidades Experimentales y toma de muestras 4.2 Fases de la Investigación 4.2.1 Primera fase 4.2.1 .1 4.2.1.2 4.2.1.3 4.2.1.4 Método de colección de las muestras seminales Método de obtención del plasma seminal Método de Swim - up 1 Dextrano Metodologías para la determinación de factores bioquímicos del plasma seminal y membrana plasmática del espermatozoide. A. Cuantificación de fructosa en plasma seminal, reacción de Seliwanoff. B. Cuantificación de ácido cítrico en plasma seminal. Reacción de Furth Hermann. C. Cuantificación de proteínas totales en plasma seminal. Reacción de Folin Lowry ... D. Cuantificación de proteínas totales en plasma seminal. Método de Bradford ... E. Determinación de la actividad enzimática de la aspartato aminotransferasa. Técnica de Reitman Frankel. F. Determinación de fosfolípidos de membrana en espermatozoides. 4.2.1 .5 Métodos para obtener y precipitar proteínas de membrana. Extracción proteínas de membrana con SOS. Precipitación de proteínas de membrana (Acido tricloroacético- acetona). 4.2.1.6 Solubilización de las muestras de proteína. Solubilización de las proteínas del plasma seminal (Preparación para la electroforesis bidimensional). Solubilización de las proteínas de membrana del espermatozoide (Preparación para la electroforesis bidimensional. 4.2.1 .7 Métodos de separación de proteínas en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes. Electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE) Preparación de la muestra Electroforesis Análisis de los geles Electroforesis desnaturalizante en dos dimensiones. 20-PAGE (Bidimensional) A. Primera dimensión (lsoelectroenfoque). lsoelectroenfoque (IEF) B. Equilibrio de las Tiras (IPGs) C. Segunda dimensión (Eiectroforesis en SDS-Poliacrilamida) o SDS-PAGE. Elaboración de los geles de poliacrilamida - Electroforesis en SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE) D. Métodos de tinción del gel Tinción con Sypro Ruby 1 1 1 :1 1 1 1 1 1 1 !l 11 1 :1 1 1 1 1 1 ¡• ~-- - Tinción con azul de Coomassie E. · Captación y análisis de la imagen del gel 4.2.2 Segunda fase (Resultados de la investigación) 4.2.2.1 Concentraciones de fructosa en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.2 Concentraciones de ácido cítrico en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.3 Concentración de proteína total en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.4 Relación entre las concentraciones de fructosa, ácido cítrico y proteína total en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.5 Efecto de las épocas climáticas en las concentraciones de fructosa, ácido cítrico y proteína. - Efectos en la concentración de fructosa. - Efectos en la concentración de ácido cítrico - Efectos en la concentración de proteínas. 4.2.2.6 Actividad enzimática intracelular y extracelular de la Aspartato Aminotransferasa (AST). Relación entre valores de actividad enzimática y parámetros de calidad seminal. - Actividad General lntra y Extracelular. - Actividad enzimática intra y extracelular de la AST en toros de razas criollas. - Relación entre cali<;lad seminal y la actividad de la AST en toros de razas criollas. 4.2.2. 7 Concentraciones de fosfolípidos en la membrana (fosfatidilcolina y fosfatidilinositol) de espermatozoides de las razas Blanco Orejinegro y Cebú Fosfatidilinositol. · Fosfatidilcolina 4.2.3 Tercera fase. Cuantificación por electroforesis de las proteínas del plasma seminal y de la membrana del espermatozoide. 4.2.3.1 Separación de proteínas del plasma seminal por electroforesis SOS-PAGE - Proteínas del plasma seminal de la raza Sanmartinero. Efecto de la época en la concentración de las bandas de proteína. Proteínas del plasma seminal de la raza Cebú. Comparación entre el patrón electroforético de las proteínas del plasma seminal de Toros Sanmartinero y toros Cebú en la época de lluvia. Proteínas del plasma seminal de la raza Romosinuano. Efecto de la época en la concentración de las bandas de proteína Proteínas del plasma seminal de la raza Blanco Orejinegro. 4.2.3.2 Separación de proteínas de la membrana del espermatozoide por electroforesis SOS-PAGE - Proteínas de la membrana del espermatozoide de la raza Sanmartinero. 4.2.3.3 Separación de proteínas del Plasma seminal por electroforesis 20 SOS-PAGE - Proteínas del plasma seminal de la raza Sanmartinero Mapa referenciai20-PAGE de proteínas de plasma seminal. Cambios en el perfil electroforético de las proteínas en función del periodo climático. -Proteínas del plasma seminal de la raza Cebú Mapa referencial 20-PAGE de proteínas de plasma seminal. Estudio comparativo de los perfiles electroforéticos de las proteínas del plasma seminal de las razas Sanmartinero y51 p.application/pdfspaInforme de investigaciónProyectos de investigaciónToros -- InvestigacionesFertilidadinfo:eu-repo/semantics/openAccessAtribución 4.0 Internacional (CC BY 4.0)Reproducción